云南奶（水）�？谔阋吆筒际蠗U菌病血清學(xué)監(jiān)測(cè)及防控措施

楊仕標(biāo)  信愛國  趙文華  王金萍  李富祥  胡騎  苗海生

云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院

云南省熱帶亞熱帶動(dòng)物病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

（昆明金殿，650224）

摘要：本文報(bào)告云南奶（水）牛口蹄疫和布氏桿菌病血清學(xué)監(jiān)測(cè)的結(jié)果，并在監(jiān)測(cè)的基礎(chǔ)上提出相應(yīng)的防控措施。2011年度，云南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（奶牛）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系奶牛疫病控制功能實(shí)驗(yàn)室在體系所屬的2個(gè)綜合試驗(yàn)站和4個(gè)區(qū)域推廣站各示范場、養(yǎng)殖小區(qū)和奶牛養(yǎng)殖戶采集奶牛、奶水牛血清樣品共計(jì)311份。應(yīng)用口蹄疫A型、亞洲I型和O型免疫抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)口蹄疫O型陽性數(shù)253份，陽性率81.35%；亞洲1型陽性數(shù)278份，陽性率89.39%；A型抗體陽性數(shù)110份，陽性率35.37%。應(yīng)用口蹄疫3ABC抗體檢測(cè)方法檢測(cè)檢出陽性樣品7份，陽性率2.25%。應(yīng)用IDEXX牛布氏桿菌抗體檢測(cè)方法檢測(cè)檢出陽性樣品2份，陽性率0.64%。針對(duì)本次實(shí)施的口蹄疫和布氏桿菌病血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果，提出了相應(yīng)的防控措施：強(qiáng)化奶牛和奶水牛犢牛免疫、跟蹤監(jiān)測(cè)和完善生物安全措施。

關(guān)鍵詞：奶（水）牛；監(jiān)測(cè)；口蹄疫；布什桿菌；防控措施

1. 引言

云南省地處我國西南邊疆，具有獨(dú)特的立體氣候條件，奶牛和奶水牛養(yǎng)殖區(qū)域處于熱帶、亞熱帶、溫帶等不同的氣候帶。這種獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境，使奶牛和奶水牛疫病復(fù)雜化。云南與越南、老撾和緬甸等東南亞國家接壤，邊境線長達(dá)4010公里；由于歷史、傳統(tǒng)和經(jīng)濟(jì)的原因，邊境地區(qū)存在一定規(guī)模的動(dòng)物及其產(chǎn)品非法貿(mào)易，疫病引入的風(fēng)險(xiǎn)極大。云南省水牛存欄259.6萬頭，其中，能繁母牛82.93萬頭；水牛數(shù)量僅次于廣西，居全國第二位，目前在大理、德宏、保山等地區(qū)奶水牛存欄約6萬頭，奶水牛疫病的流行、發(fā)生表現(xiàn)出獨(dú)特的特征。

口蹄疫是一種重要的跨境動(dòng)物傳染病�？谔阋叩陌l(fā)生、流行所造成的經(jīng)濟(jì)損失除死亡、處置疫情等直接經(jīng)濟(jì)損失外，因消費(fèi)者消費(fèi)信心下降所造成的產(chǎn)品消費(fèi)下降、國際出口貿(mào)易限制等是更為重大的經(jīng)濟(jì)損失。奶牛布氏桿菌病是重要的人畜共患病之一。近年來，我國人間和畜間布氏桿菌病的發(fā)生有明顯增加的趨勢(shì)，我國采取了一系列的防控措施，取得了一定的效果。對(duì)口蹄疫和布氏桿菌病實(shí)施監(jiān)測(cè)，是制定防控措施的基礎(chǔ)，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

根據(jù)云南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（奶牛）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系奶牛疫病控制功能實(shí)驗(yàn)室的任務(wù)需要，2011年1月至2月，在體系所屬的2個(gè)綜合試驗(yàn)站和4個(gè)區(qū)域推廣站各示范場、養(yǎng)殖小區(qū)和奶牛養(yǎng)殖戶采集奶牛、奶水牛血清樣品共計(jì)311份。檢測(cè)奶�？谔阋逴型、亞洲1型和A型免疫抗體和非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體，評(píng)估免疫效果和自然感染情況；應(yīng)用ELISA試驗(yàn)檢測(cè)奶牛布氏桿菌病抗體，評(píng)估感染情況。并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果提出奶�？谔阋吆筒际蠗U菌病防控建議。

2. 材料和方法

2.1 材料

2.1.1 血清樣品：311份血清樣品采自體系所屬的2個(gè)綜合試驗(yàn)站和4個(gè)區(qū)域推廣站，其中奶牛血清80份，奶水牛血清231份（見表1）。

2.1.2 口蹄疫免疫抗體檢測(cè)試劑盒：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所口蹄疫液相阻斷ELISA診斷試劑盒，口蹄疫A型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒,批號(hào)2009103003；亞洲I型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒,批號(hào)2009110302；O型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒,批號(hào)2010053101。

2.1.3  口蹄疫3ABC抗體檢測(cè)試劑盒：瑞典Svanova公司口蹄疫3ABC抗體檢測(cè)試劑盒，批號(hào)10-2800-10。

2.1.4 布氏桿菌病檢測(cè)試劑盒：牛羊布病抗體檢測(cè)試劑盒為IDEXX生產(chǎn)牛布氏桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品批號(hào)：220-T271。

2.2  方法

2.2.1 免疫抗體檢測(cè)：口蹄疫A型、亞洲I型和O型免疫抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)方法按照試劑盒說明書進(jìn)行，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)以病毒抗原對(duì)照平均OD492nm值的50%為臨界值，被檢血清稀釋孔OD492nm值大于臨界值的孔為陰性孔，小于或等于臨界值的孔為陽性孔。

2.2.2 3ABC抗體檢測(cè)：口蹄疫3ABC抗體檢測(cè)方法按照試劑盒說明書進(jìn)行；結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：OD校正值=ODNSP 3ABC值-OD對(duì)照值；陽性百分比（PP）=樣品OD校正值/陽性對(duì)照OD校正值×100。當(dāng)陽性對(duì)照的OD校正值大于0.8且陰性對(duì)照的OD校正值小于0.3時(shí)試驗(yàn)數(shù)據(jù)有效。PP值<48，結(jié)果判定為陰性。PP值≥48，結(jié)果判定為陽性。

2.2.3 布氏桿菌病檢測(cè)：布氏桿菌病抗體檢測(cè)方法按照美國IDEXX牛布氏桿菌抗體檢測(cè)試劑盒說明進(jìn)行，檢測(cè)結(jié)果判定方法如下：

計(jì)算值%=（OD樣品-OD陰性）／（OD陽性-OD陰性）×100%

判定標(biāo)準(zhǔn):計(jì)算值%≥80%為陽性,計(jì)算值＜80%為陰性

    3.結(jié)果

3.1 免疫抗體檢測(cè)

應(yīng)用口蹄疫A型、亞洲I型和O型免疫抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)奶牛、奶水牛血清樣品311份, 口蹄疫O型陽性數(shù)253份，陽性率81.35%；亞洲1型陽性數(shù)278份，陽性率89.39%；A型抗體陽性數(shù)110份，陽性率35.37%（表1）。

如果將所檢測(cè)的血清樣品按照奶水牛和奶牛分類, 檢測(cè)奶水牛血清樣品231份, 口蹄疫O型陽性數(shù)210份，陽性率90.91%；亞洲1型陽性數(shù)219份，陽性率94.81%；A型抗體陽性數(shù)91份，陽性率39.39%。檢測(cè)奶牛血清樣品80份, 口蹄疫O型陽性數(shù)43份，陽性率53.75%；亞洲1型陽性數(shù)59份，陽性率73.75%；A型抗體陽性數(shù)19份，陽性率23.75%。

3.2  3ABC抗體檢測(cè)

應(yīng)用口蹄疫3ABC抗體檢測(cè)方法檢測(cè)奶牛血清樣品80份,檢出陽性樣品6份，陽性率7.50%；檢測(cè)奶水牛血清樣品231份,檢出陽性樣品1份，陽性率0.43%；合計(jì)檢測(cè)奶牛和奶水牛血清樣品311份,檢出陽性樣品7份，陽性率2.25%（表1）。

3.3  布氏桿菌病檢測(cè)

應(yīng)用IDEXX牛布氏桿菌抗體檢測(cè)方法檢測(cè)奶牛血清樣品80份,檢出陽性樣品數(shù)為0，檢測(cè)奶水牛血清樣品231份,檢出陽性樣品2份，陽性率0.87%；合計(jì)檢測(cè)奶牛和奶水牛血清樣品311份,檢出陽性樣品2份，陽性率0.64%（表1）。

    4. 討論

4.1 口蹄疫免疫抗體

本次血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，所檢測(cè)的奶牛和奶水牛血清樣品口蹄疫O型陽性率81.35%，亞洲1型陽性率89.39%，A型陽性率35.37%。其中，口蹄疫O型陽性率和亞洲1型陽性率已達(dá)到國家規(guī)定的免疫合格率標(biāo)準(zhǔn)。在檢測(cè)結(jié)果中，奶�？谔阋逴型陽性率和亞洲1型陽性率顯著低于奶水牛，局部采樣地點(diǎn)陽性率偏低，這可能與采集樣品時(shí)奶牛血清樣品多數(shù)來自犢牛有關(guān)。總體上，經(jīng)過多年實(shí)施的口蹄疫O型和亞洲1型強(qiáng)制免疫，取得了較好的免疫效果。

而A型口蹄疫抗體陽性率僅為35.37%，所檢測(cè)奶（水）牛群體仍然為高度易感，防控應(yīng)當(dāng)以實(shí)施生物安全措施為主。A型口蹄疫抗體陽性率偏低的原因，可能與實(shí)施的免疫措施、所選用疫苗質(zhì)量、以及實(shí)施強(qiáng)制免疫年限較短等有關(guān)，具體的原因仍需要進(jìn)一步研究探索。

4.2  口蹄疫3ABC抗體

在本次口蹄疫3ABC抗體檢測(cè)中，檢測(cè)奶牛血清樣品80份,檢出陽性樣品6份，陽性率7.50%，陽性樣品分布在2個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場，陽性樣品數(shù)分別為1份和5份。檢測(cè)奶水牛血清樣品231份,檢出陽性樣品1份，陽性率0.43%。合計(jì)檢測(cè)奶牛和奶水牛血清樣品311份,檢出陽性樣品7份，陽性率2.25%，分別分布在3個(gè)養(yǎng)殖場。

一般認(rèn)為，口蹄疫3ABC抗體是由口蹄疫病毒在復(fù)制的過程中所產(chǎn)生的非結(jié)構(gòu)蛋白所誘導(dǎo)的，因而，口蹄疫3ABC抗體陽性可能是自然感染的結(jié)果。但有證據(jù)顯示，如果所使用的疫苗純度較差，則可能包含非結(jié)構(gòu)蛋白，進(jìn)而導(dǎo)致因疫苗免疫而出現(xiàn)的3ABC陽性。

4.3 布氏桿菌病抗體

檢測(cè)奶牛血清樣品80份,檢出陽性樣品數(shù)為0，檢測(cè)奶水牛血清樣品231份,檢出陽性樣品2份，陽性率0.87%，且僅分布在1個(gè)養(yǎng)殖場。本次檢測(cè)所得到的陽性率遠(yuǎn)低于相關(guān)報(bào)導(dǎo)，分析其原因包括：（1）云南非布氏桿菌病嚴(yán)重省份，布氏桿菌病呈高度散發(fā)，是可防可控的；（2）多年來實(shí)施嚴(yán)格檢測(cè)和凈化措施，即實(shí)施嚴(yán)格檢疫，血清學(xué)陽性者一律撲殺，取得較好的防控效果。

    5. 防控措施

針對(duì)本次實(shí)施的口蹄疫和布氏桿菌病血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果，提出了相應(yīng)的防控措施，并要求在各綜合試驗(yàn)站和區(qū)域推廣站奶（水）牛養(yǎng)殖場實(shí)施推廣，所采取的措施主要包括如下幾個(gè)方面。

5.1 強(qiáng)化奶牛和奶水牛犢牛免疫  

宏觀上我國實(shí)施的口蹄疫強(qiáng)制免疫計(jì)劃是每年春秋2次免疫，但對(duì)于奶（水）牛規(guī)模養(yǎng)殖場，需要強(qiáng)化犢牛免疫工作，最大限度地減少免疫空白期。因此需要對(duì)犢牛實(shí)施非季度性的補(bǔ)免，以提高免疫抗體陽性率水平，預(yù)防口蹄疫在處于免疫空白期內(nèi)的犢牛群中發(fā)生。

5.2 跟蹤監(jiān)測(cè)  

本次實(shí)施的血清學(xué)監(jiān)測(cè)，引入和應(yīng)用奶（水）牛個(gè)體識(shí)別體系，所采集的樣品的奶（水）牛個(gè)體可追溯。對(duì)于口蹄疫3ABC抗體陽性牛和布氏桿菌病抗體陽性牛實(shí)施個(gè)體跟蹤調(diào)查，采取了隔離、病史調(diào)查、血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果驗(yàn)證和病原學(xué)檢測(cè)。

5.3 完善生物安全措施

要求體系各綜合試驗(yàn)站和區(qū)域推廣站對(duì)所屬的奶（水）牛養(yǎng)殖場完善生物安全措施建設(shè)，并由體系奶牛疫病實(shí)驗(yàn)室提供技術(shù)支持，具體的防疫技術(shù)措施包括：門衛(wèi)消毒制度、日常防疫制度、免疫與監(jiān)測(cè)、病牛隔離治療、新引入牛隔離檢疫措施。